Plasmide Double Nickase (m2) Bim: sc-419332-NIC-2

Chez la souris, Bcl2l11 code la protéine Bim, membre « BH3-only » de la famille Bcl‑2, un puissant régulateur pro‑apoptotique qui favorise la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale en antagonisant les protéines anti‑apoptotiques de la famille Bcl‑2 et en activant Bax/Bak. Bim intègre des signaux liés au retrait de cytokines, au stress oxydatif et au stress du réticulum endoplasmique, ainsi qu’aux voies des facteurs de croissance, notamment PI3K–AKT et MAPK/ERK, façonnant ainsi l’apoptose intrinsèque, l’homéostasie des cellules immunitaires et la tolérance via l’élimination des lymphocytes autoréactifs. Une activité dérégulée de Bcl2l11/Bim a été associée, dans des modèles précliniques, à une survie lymphocytaire altérée, à l’auto‑immunité et à la persistance des cellules tumorales, ce qui en fait un nœud clé des réseaux de réponse au stress et de décision du destin cellulaire. L’édition du gène Bcl2l11 chez la souris permet des études mécanistiques de la signalisation apoptotique, des phénotypes hématopoïétiques et immunitaires, ainsi que des dépendances spécifiques au contexte dans des modèles de recherche sur le cancer et les maladies inflammatoires.

Bim Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Bcl2l11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Bcl2l11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Bcl2l11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Bcl2l11.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.