Plasmide Double Nickase (h) Biglycan: sc-401408-NIC

BGN code pour le biglycane, un protéoglycane de la matrice extracellulaire riche en leucines (SLRP) qui régule la fibrillogenèse du collagène, l’organisation de la matrice et la biomécanique des tissus. Le biglycane se lie à des facteurs de croissance et à des récepteurs de surface cellulaire, influençant des voies de signalisation telles que TGF-β, Wnt/β-caténine et les réponses inflammatoires médiées par les récepteurs de type Toll, qui modulent l’adhésion, la migration et la différenciation cellulaires. Des altérations de l’expression de BGN et le remodelage des protéoglycanes sont associés à la fibrose, au remodelage vasculaire et cardiaque, à la dégénérescence ostéoarticulaire et aux interactions tumeur–stroma, faisant de BGN un nœud utile pour étudier la signalisation cellulaire pilotée par la MEC et la mécanobiologie. Dans les systèmes humains, BGN est fréquemment utilisé comme marqueur et médiateur fonctionnel de l’activation stromale et des signaux inflammatoires associés à la matrice.

Biglycan Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BGN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BGN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BGN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BGN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.