BID Double Nickase Plasmid (h): sc-400510-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BID Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BID Double-Nickase-Plasmid (h) und BID Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BID abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BID: sc-373939
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BID Double Nickase Plasmid (h) | sc-400510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BID Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BID kodiert ein proapoptotisches, ausschließlich BH3-domänenhaltiges Mitglied der BCL-2-Familie, das als entscheidendes Bindeglied zwischen extrinsischer Todesrezeptor-Signalübertragung und dem mitochondrialen (intrinsischen) Apoptoseweg fungiert. Nach der Spaltung durch Caspase‑8 zu verkürztem BID (tBID) fördert es die Aktivierung von BAX/BAK, die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran, die Freisetzung von Cytochrom c und die nachgeschaltete Aktivierung der Caspase-Kaskade. Die BID-Aktivität verknüpft Stress- und Immunsignale mit Zellschicksalsentscheidungen und überschneidet sich mit Prozessen wie DNA-Schadensantworten und inflammatorischer Signalgebung. Eine Fehlregulation der BID-abhängigen Apoptose wurde mit dem Überleben von Krebszellen, Neurodegeneration und immunvermittelten Gewebeschäden in Verbindung gebracht, was seinen häufigen Einsatz als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur Apoptose und mitochondrialen Signalübertragung erklärt.
BID Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BID-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BID abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BID-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BID-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.