Plasmide CRISPR/Cas9 KO BF-1 (h): sc-402933

Présentation

Le gène humain **FOXG1** code le facteur de transcription à domaine forkhead **BF-1**, un régulateur maître de la mise en place du télencéphale et du maintien des progéniteurs neuraux au cours du développement cérébral. BF-1 agit principalement comme un répresseur transcriptionnel qui s’intègre aux réseaux de signalisation du développement, notamment les programmes associés à **Notch**, **Wnt/β-caténine** et **TGF-β/BMP**, afin de contrôler la prolifération, la différenciation et l’identité régionale. En modulant des gènes du cycle cellulaire et des déterminants du destin neuronal, FOXG1 influence la neurogenèse corticale et la maturation synaptique. Une activité ou un dosage dérégulé de FOXG1 est fortement associé à des troubles du neurodéveloppement et à une altération du fonctionnement des réseaux neuronaux, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques dans des modèles de lignée neuronale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BF-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FOXG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FOXG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FOXG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BF-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FOXG1 pour l'étude de la signalisation de BF-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FOXG1 essentiels à la fonction de BF-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FOXG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FOXG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BF-1 plasmide HDR (h) et le BF-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FOXG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FOXG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.