Plasmide CRISPR/Cas9 KO Bex2 (h): sc-404711

Présentation

BEX2 (brain expressed X-linked 2) code Bex2, une petite protéine intrinsèquement désordonnée, enrichie dans les tissus neuraux et d’autres tissus, qui agit comme un modulateur contextuel des programmes transcriptionnels et des réseaux d’interactions protéine–protéine. Les activités rapportées placent Bex2 à l’interface entre la signalisation des neurotrophines et les voies de réponse au stress, influençant la différenciation neuronale, le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose via des interactions susceptibles d’affecter la voie MAPK/ERK et d’autres signalisations apparentées de survie. Une expression altérée de BEX2 a été décrite dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment des processus neurodéveloppementaux et la biologie tumorale, où elle a été associée à des modifications de la prolifération, des programmes de lignée et des phénotypes de réponse aux traitements. Ces caractéristiques font de BEX2 un nœud utile pour analyser le couplage entre signalisation et transcription ainsi que les décisions de destin cellulaire dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Bex2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BEX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BEX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BEX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Bex2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BEX2 pour l'étude de la signalisation de Bex2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BEX2 essentiels à la fonction de Bex2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BEX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Bex2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Bex2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BEX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Bex2 plasmide HDR (h) et le Bex2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BEX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BEX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.