Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bex1: sc-404292-ACT

BEX1 (brain expressed X-linked 1) code la protéine Bex1, un facteur de type adaptateur intrinsèquement désordonné, enrichi dans les tissus neuronaux, qui module des programmes transcriptionnels et des voies de transduction du signal liés à la différenciation neuronale, à la survie et aux réponses au stress. Bex1 a été impliquée dans la régulation de la progression du cycle cellulaire et de l’apoptose via des interactions avec des voies telles que la signalisation des neurotrophines et des processus associés à MAPK/ERK, avec des effets dépendant du contexte sur la prolifération et la différenciation. Des altérations de l’expression de BEX1 ont été rapportées dans de multiples types de tumeurs ainsi que dans des travaux sur la neurobiologie du développement et la neurodégénérescence, ce qui étaye son utilisation comme marqueur et comme nœud mécanistique dans la recherche sur la spécification de lignée et la plasticité cellulaire. Ces propriétés rendent BEX1 pertinent pour disséquer les réseaux de régulation génique qui couplent l’état de différenciation au contrôle de la croissance.

Bex1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BEX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bex1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BEX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BEX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bex1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BEX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bex1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bex1 dans les cellules tumorales présentant une expression de BEX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.