Plasmide CRISPR/Cas9 KO betaKlotho (h): sc-401614

Présentation

KLB code pour βKlotho, un co-récepteur transmembranaire à passage unique qui confère une spécificité de ligand aux facteurs de croissance fibroblastiques endocrines, en particulier FGF19 et FGF21, via la formation de complexes avec les FGFR. Dans des tissus humains tels que le foie et le tissu adipeux, la signalisation dépendante de βKlotho régule l’activation de la voie MAPK/ERK ainsi que des programmes transcriptionnels contrôlant l’homéostasie des acides biliaires, l’utilisation des lipides, le métabolisme du glucose et l’équilibre énergétique. Une expression modifiée de KLB ou une altération de la fonction de βKlotho a été associée à des dérégulations métaboliques, notamment des phénotypes liés à l’obésité, une résistance à l’insuline et la stéatose hépatique non alcoolique, et peut moduler les voies de signalisation du stress et de l’inflammation dans des cellules métaboliquement actives. Ces caractéristiques font de KLB un nœud utile pour analyser les voies des FGF endocrines et la communication métabolique spécifique aux tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO betaKlotho (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine betaKlotho.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLB pour l'étude de la signalisation de betaKlotho, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLB essentiels à la fonction de betaKlotho
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le betaKlotho plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le betaKlotho plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le betaKlotho plasmide HDR (h) et le betaKlotho (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.