Plasmide CRISPR d'Activation (h) betaKlotho: sc-401614-ACT

Le gène humain **KLB** code la **bêtaKlotho**, un co‑récepteur transmembranaire à passage unique qui confère une spécificité de ligand à la signalisation endocrine des FGF, en facilitant notamment la signalisation **FGF19/FGFR4** dans les hépatocytes et **FGF21/FGFR1c** dans les tissus métaboliques. Par ces voies, la bêtaKlotho régule l’homéostasie des acides biliaires, le métabolisme du glucose et des lipides, ainsi que l’équilibre énergétique, en modulant les programmes transcriptionnels en aval de **MAPK/ERK** et des voies associées. Une expression ou une fonction altérée de **KLB** a été associée à des dérégulations métaboliques, notamment l’obésité, la résistance à l’insuline et des processus liés à la stéatose hépatique non alcoolique, et pourrait influencer la croissance hépatique et les réponses au stress. Comme **KLB** est un déterminant clé de la réactivité aux FGF endocrines, il est fréquemment étudié dans des modèles de détection des nutriments, de signalisation des hépatocytes et de dialogue croisé tissu adipeux–foie.

betaKlotho Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KLB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

betaKlotho Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KLB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KLB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de betaKlotho. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KLB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de betaKlotho au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie betaKlotho dans les cellules tumorales présentant une expression de KLB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.