Plásmido CRISPR de Activación (h) beta-catenin: sc-400038-ACT

CTNNB1 codifica β-catenina, una proteína multifuncional que conecta las uniones adherentes basadas en cadherinas con el citoesqueleto de actina y actúa como un co-regulador transcripcional central en la señalización canónica de Wnt. En respuesta a la activación de la vía Wnt, la β-catenina estabilizada se acumula en el núcleo y se asocia con los factores TCF/LEF para controlar programas génicos que regulan la proliferación, la diferenciación y estados celulares tipo madre. La actividad de CTNNB1 se integra con la dinámica del complejo de destrucción APC/AXIN/GSK3β y se cruza con vías que controlan la organización epitelial y las decisiones de destino celular. La señalización desregulada de β-catenina y la alteración de la adhesión célula–célula se implican con frecuencia en la transformación oncogénica y en trastornos del desarrollo, lo que convierte a CTNNB1 en un objetivo común para estudios mecanísticos en señalización y biología celular.

beta-catenin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTNNB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

beta-catenin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTNNB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTNNB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de beta-catenin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTNNB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de beta-catenin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía beta-catenin en células tumorales con expresión de CTNNB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.