Plásmido Doble Nickase (m) beta Actin: sc-418965-NIC

El gen Actb en ratón codifica la β-actina, una proteína del citoesqueleto altamente conservada que polimeriza en actina filamentosa para sostener la forma celular, la tensión cortical y el transporte intracelular. La dinámica de la actina coordina procesos fundamentales como la migración celular, la adhesión, la citocinesis y la mecanotransducción, a través de vías que implican GTPasas de la familia Rho, señalización por integrinas y reguladores de unión a actina como el complejo Arp2/3 y la cofilina. La alteración de la remodelación de la actina afecta el desarrollo y la homeostasis tisular, y es ampliamente relevante para fenotipos asociados a enfermedad que implican cambios en la motilidad celular, la función de barrera y la integridad del citoesqueleto. Como nodo central en las redes del citoesqueleto, Actb se utiliza con frecuencia para investigar relaciones estructura–función y para normalizar o establecer referencias de perturbaciones celulares en sistemas modelo de ratón.

beta Actin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Actb en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Actb. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Actb. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Actb alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.