Plasmide CRISPR/Cas9 KO beta Actin (m): sc-418965

Présentation

Actb code la bêta‑actine murine, une protéine du cytosquelette hautement conservée qui polymérise en microfilaments afin de soutenir la forme cellulaire, la polarité et la stabilité mécanique. La dynamique de la bêta‑actine sous-tend des processus fondamentaux, notamment la cytocinèse, le trafic vésiculaire et la migration cellulaire, via une régulation coordonnée de la nucléation, de la ramification et du renouvellement de l’actine dans des voies impliquant les GTPases de la famille Rho et des protéines liant l’actine. Au-delà de ses rôles structuraux, le remodelage de l’actine influence les programmes transcriptionnels et la transduction du signal en modulant la mécanotransduction et les pools d’actine nucléaire. Une organisation de l’actine dérégulée est largement impliquée, dans des modèles expérimentaux, dans des défauts du développement, une réparation tissulaire altérée, des changements de motilité des cellules immunitaires et l’invasion des cellules tumorales, faisant d’Actb un locus de référence clé en biologie cellulaire et dans l’étude des mécanismes de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO beta Actin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Actb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Actb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Actb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine beta Actin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Actb pour l'étude de la signalisation de beta Actin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Actb essentiels à la fonction de beta Actin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Actb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le beta Actin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le beta Actin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Actb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le beta Actin plasmide HDR (m) et le beta Actin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Actb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Actb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.