Particules Lentivirales d'Activation (m) beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β₂-AR: sc-419027-LAC

Adrb2 code le récepteur β2-adrénergique murin (ADRB2/β2-AR), un récepteur couplé aux protéines G qui répond aux catécholamines pour réguler la signalisation cAMP/PKA et les programmes transcriptionnels en aval. Au-delà du couplage classique à Gs, ADRB2 met en jeu une désensibilisation dépendante des GRK/β-arrestines, l’internalisation du récepteur et la modulation de la voie MAPK, reliant la signalisation aiguë à une adaptation cellulaire à plus long terme. Dans divers tissus, le β2-AR influence le tonus du muscle lisse, la régulation cardiaque et métabolique ainsi que la signalisation des cellules immunitaires, faisant d’Adrb2 un nœud clé des réseaux de réponse au stress. Des modifications de l’expression d’ADRB2 ou de la dynamique de sa signalisation ont été associées à l’hyperréactivité des voies aériennes, à des phénotypes cardiovasculaires et à la biologie de l’inflammation, ce qui soutient des études mécanistiques dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Adrb2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Adrb2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Adrb2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.