Plasmide CRISPR d'Activation (m) beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β₂-AR: sc-419027-ACT

Adrb2 chez la souris code le récepteur β2-adrénergique (ADRB2/β2-AR), un récepteur couplé aux protéines G qui transmet les signaux des catécholamines afin de réguler la voie intracellulaire cAMP/PKA et la transcription en aval dépendante de CREB. La signalisation via β2-AR module le tonus du muscle lisse, la chronotropie cardiaque, les flux métaboliques et l’activation des cellules immunitaires ; elle mobilise également les voies GRK/β-arrestine, qui façonnent la désensibilisation du récepteur, son trafic intracellulaire et la sortie MAPK. Dans des modèles murins, l’activité d’Adrb2 influence la physiologie liée à la réponse au stress, la réactivité des voies aériennes, l’équilibre énergétique et les programmes inflammatoires, ce qui le rend pertinent pour l’étude de phénotypes de type asthmatique, de traits cardiométaboliques et d’interactions neuro-immunes. Ces fonctions font d’Adrb2 un nœud utile pour disséquer le contrôle adrénergique des réseaux de signalisation des GPCR et de la régulation des états cellulaires.

beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Adrb2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Adrb2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Adrb2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Adrb2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR dans les cellules tumorales présentant une expression de Adrb2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.