Plasmide Double Nickase (h) beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1: sc-401093-NIC

ATP1B1 code la sous-unité bêta 1 de la Na⁺/K⁺-ATPase, un complexe ATPase de type P de la membrane plasmique qui maintient les gradients de sodium et de potassium nécessaires au potentiel de membrane, à l’équilibre osmotique et au transport actif secondaire. En soutenant l’homéostasie électrochimique, ATP1B1 influence la polarité épithéliale, la régulation du volume cellulaire et la signalisation liée à l’excitabilité, et peut moduler des processus d’adhésion via ses effets sur l’organisation membranaire. Des altérations de l’expression ou de la stœchiométrie des sous-unités de la Na⁺/K⁺-ATPase ont été associées à une dérégulation du transport ionique dans la physiologie rénale et cardiovasculaire, et ont été étudiées dans le contexte du métabolisme des cellules tumorales et des réponses au stress. En conséquence, ATP1B1 est fréquemment étudié dans des voies reliant l’homéostasie ionique à la prolifération, à la fonction barrière et à la transduction du signal.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP1B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP1B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP1B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP1B1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.