Plasmide CRISPR d'Activation (h) beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1: sc-401093-ACT

ATP1B1 code la sous-unité bêta 1 de la Na⁺/K⁺‑ATPase, un complexe ATPase de type P de la membrane plasmique qui maintient les gradients électrochimiques en couplant l’hydrolyse de l’ATP au transport de Na⁺ et de K⁺. En soutenant le potentiel de membrane et l’équilibre osmotique, ATP1B1 influence la polarisation épithéliale, l’organisation des jonctions serrées et les processus de transport actif secondaire qui dépendent des gradients ioniques. La fonction de la Na⁺/K⁺‑ATPase s’articule avec des voies de signalisation, notamment des cascades dépendantes de Src, ainsi qu’avec des programmes plus larges de réponse au stress qui relient l’homéostasie ionique à la croissance et à la différenciation. Un dérèglement de l’expression d’ATP1B1 ou de l’équilibre entre sous-unités de la Na⁺/K⁺‑ATPase a été associé à une altération de la fonction barrière et à des phénotypes cellulaires pertinents pour la biologie rénale, cardiovasculaire et du cancer.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATP1B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATP1B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATP1B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATP1B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie beta 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATP1B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.