Plasmide CRISPR d'Activation (h) beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β₁-AR: sc-400660-ACT

ADRB1 code le récepteur β1-adrénergique humain (β1-AR), un récepteur couplé aux protéines G qui s’accouple principalement à Gs afin de stimuler l’adénylate cyclase, d’augmenter l’AMPc et d’activer une signalisation dépendante de la PKA. Cette voie régule la chronotropie et l’inotropie cardiaques, module la gestion du calcium et influence les réponses transcriptionnelles via des effecteurs en aval tels que CREB. La signalisation du β1-AR s’articule aussi avec les mécanismes de désensibilisation et de trafic des GPCR, notamment la phosphorylation médiée par GRK/β-arrestine, l’internalisation et la resensibilisation du récepteur. Une expression ou une signalisation dérégulée d’ADRB1 est impliquée dans la physiopathologie cardiovasculaire et constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier, dans des cellules humaines, des réseaux de signalisation sensibles au stress et la pharmacologie des récepteurs.

beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADRB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADRB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADRB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADRB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR dans les cellules tumorales présentant une expression de ADRB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.