Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bcr: sc-401514-ACT

Le gène humain **BCR** code la protéine Bcr, un régulateur cytoplasmique multifonctionnel doté d’une activité kinase sérine/thréonine et d’un domaine RhoGEF qui module la signalisation des petites GTPases. En agissant sur la dynamique du cytosquelette dépendante de RAC1/CDC42, le trafic membranaire et les voies de signalisation sensibles au stress, Bcr contribue au contrôle de l’adhésion cellulaire, de la migration et de la prolifération. **BCR** est largement étudié en hémato-oncologie en raison de son implication dans des événements de fusion génique oncogéniques et du remaniement des voies de signalisation en aval. Des altérations de l’expression ou de la régulation de **BCR** constituent un point d’entrée pertinent pour disséquer les voies associées aux kinases et aux GTPases, impliquées dans la transformation et les programmes de signalisation spécifiques des lignages.

Bcr Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bcr Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bcr. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bcr au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bcr dans les cellules tumorales présentant une expression de BCR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.