Plasmide CRISPR d'Activation (h) BCLAF1: sc-403820-ACT

BCLAF1 (BCL2 associated transcription factor 1) est une protéine nucléaire se liant à l’ADN et à l’ARN, qui régule des programmes transcriptionnels et la maturation des ARNm, en reliant le contrôle associé à la chromatine à l’épissage alternatif et à la stabilité des ARN. Elle participe aux réponses au stress cellulaire et aux processus liés aux dommages de l’ADN via des interactions avec des régulateurs transcriptionnels et des composants du spliceosome, influençant la progression du cycle cellulaire et la signalisation associée à l’apoptose. Une expression ou une fonction dérégulée de BCLAF1 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux ainsi que dans des états liés à l’immunité, où des altérations de la régulation transcriptionnelle et post-transcriptionnelle peuvent remodeler les réseaux de gènes impliqués dans la prolifération, la survie et l’inflammation. Ces propriétés font de BCLAF1 un nœud utile pour disséquer le couplage transcription–épissage et les interactions entre voies de signalisation en conditions basales et de stress.

BCLAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCLAF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BCLAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCLAF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCLAF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BCLAF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCLAF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BCLAF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BCLAF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de BCLAF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.