Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bcl-x_S/L: sc-400170-ACT

BCL2L1 code les isoformes protéiques Bcl-xS/L, des régulateurs centraux de l’apoptose mitochondriale qui modulent la perméabilisation de la membrane externe via des interactions avec des membres de la famille BCL2 tels que BAX et BAK. L’épissage alternatif génère Bcl-xL, anti-apoptotique, et Bcl-xS, pro-apoptotique, reliant ainsi BCL2L1 aux décisions de destinée cellulaire au cours du développement, de l’homéostasie immunitaire et des réponses au stress cellulaire. L’activité de BCL2L1 intègre des signaux issus des voies des facteurs de croissance et du stress, influençant l’activation des caspases, l’intégrité mitochondriale et la survie face à des agressions génotoxiques ou métaboliques. Une expression dérégulée de BCL2L1 et un déséquilibre entre isoformes sont fréquemment étudiés dans la survie des cellules cancéreuses, les mécanismes de résistance aux thérapies et des modèles pertinents pour la neurodégénérescence et la vulnérabilité apoptotique.

Bcl-xS/L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCL2L1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bcl-xS/L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCL2L1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCL2L1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bcl-xS/L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCL2L1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bcl-xS/L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bcl-xS/L dans les cellules tumorales présentant une expression de BCL2L1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.