Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bcl-11b: sc-403460-ACT

BCL11B code le facteur de transcription Bcl-11b, une protéine à doigts de zinc de type C2H2 qui agit comme régulateur déterminant de lignée du développement des cellules T et de la différenciation des thymocytes. Il intègre des signaux issus de voies clés du développement, notamment Notch et les programmes transcriptionnels dépendants du TCR, afin de contrôler l’état de la chromatine et de coordonner des réseaux d’expression génique régissant la prolifération, la survie et l’engagement. Une activité dérégulée de BCL11B a été associée à une identité altérée des cellules immunitaires et à un contrôle transcriptionnel aberrant dans des contextes de maladies hématologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des circuits de régulation génique. Dans des modèles cellulaires humains, la modulation des niveaux de Bcl-11b est couramment utilisée pour explorer la différenciation, la logique des enhancers et la coopération entre facteurs de transcription.

Bcl-11b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCL11B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bcl-11b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCL11B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCL11B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bcl-11b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCL11B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bcl-11b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bcl-11b dans les cellules tumorales présentant une expression de BCL11B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.