Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bcl-11a: sc-403612-ACT

BCL11A code le facteur de transcription Bcl-11a, une protéine à doigts de zinc se liant à l’ADN, qui régule la spécification des lignages et les programmes de différenciation, en particulier au sein des compartiments hématopoïétique et immunitaire. Il intervient dans le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine, en s’intégrant à des complexes corégulateurs afin de façonner des réseaux d’expression génique impliqués dans les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la temporalité du développement. BCL11A est étroitement lié à la régulation de la globine érythroïde et, plus largement, au contrôle épigénétique de la maturation hématopoïétique, ce qui en fait un nœud clé des voies gouvernant le switching de l’hémoglobine et le développement lymphoïde. Une activité de BCL11A dérégulée a été associée à la biologie des maladies hématologiques et à des états de différenciation altérés, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique dans des études de génomique fonctionnelle.

Bcl-11a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCL11A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bcl-11a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCL11A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCL11A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bcl-11a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCL11A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bcl-11a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bcl-11a dans les cellules tumorales présentant une expression de BCL11A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.