Plasmide CRISPR d'Activation (h) BCDO2: sc-413515-ACT

Le gène humain **BCO2** code la **bêta-carotène oxygénase 2 (BCDO2)**, une enzyme mitochondriale clivant les caroténoïdes, qui catalyse le clivage oxydatif des caroténoïdes et des apocaroténoïdes apparentés, influençant ainsi l’équilibre cellulaire des rétinoïdes et l’homéostasie antioxydante. En limitant l’accumulation de caroténoïdes dans les mitochondries, BCDO2 contribue à l’intégrité mitochondriale, à la régulation des espèces réactives de l’oxygène et aux réponses au stress métabolique, en interaction avec le métabolisme lipidique et la signalisation redox. Des perturbations de l’expression de **BCO2** ont été associées dans la littérature à une altération de la signalisation dérivée des caroténoïdes/rétinoïdes et à un dysfonctionnement mitochondrial, des processus pertinents pour certains phénotypes métaboliques et pour des atteintes tissulaires liées au stress oxydatif. Ces caractéristiques font de **BCO2** une cible utile pour des études mécanistiques du métabolisme des caroténoïdes, du contrôle qualité mitochondrial et de programmes transcriptionnels dépendants du contexte.

BCDO2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCO2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BCDO2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCO2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BCDO2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCO2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BCDO2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BCDO2 dans les cellules tumorales présentant une expression de BCO2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.