BCDIN3D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406497

Übersicht

BCDIN3D (BCDIN3D-RNA-Methyltransferase) ist eine SAM-abhängige Methyltransferase, die an der Modifikation von RNA-Enden beteiligt ist und über eine Aktivität gegenüber dem 5′-Monophosphat bestimmter Vorläufer‑MikroRNAs berichtet wurde. Durch die Beeinflussung der miRNA-Reifung und der Stabilität kleiner RNAs kann BCDIN3D posttranskriptionale Genregulationsprogramme modulieren, die Zellzustandsübergänge, Proliferation und Stressantworten prägen. Funktionsstudien bringen eine dysregulierte BCDIN3D-Expression mit veränderten miRNA-Profilen und tumorbiologisch relevanten Phänotypen in Verbindung, darunter in ausgewählten zellulären Kontexten Veränderungen der Invasivität und des Metastasierungspotenzials. Daher wird BCDIN3D häufig in Signalwegen untersucht, die RNA-Prozessierung mit onkogenem Signaling und einer epigenetikähnlichen Kontrolle der Genexpression verknüpfen.

Das BCDIN3D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BCDIN3D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BCDIN3D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BCDIN3D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BCDIN3D-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BCDIN3D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BCDIN3D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BCDIN3D-Exone abzielen, die für die BCDIN3D-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BCDIN3D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BCDIN3D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BCDIN3D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BCDIN3D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BCDIN3D HDR-Plasmid (h) und BCDIN3D HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BCDIN3D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BCDIN3D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.