Plasmide CRISPR/Cas9 KO BCAS2 (h): sc-405943

Présentation

BCAS2 (breast carcinoma amplified sequence 2) code une protéine nucléaire conservée qui agit comme composant central du complexe spliceosomal associé à Prp19 et participe à l’épissage des pré‑ARNm ainsi qu’à la fidélité des sites d’épissage. Par ses fonctions dans le traitement de l’ARN et le maintien du génome, BCAS2 influence la progression du cycle cellulaire, les programmes transcriptionnels et les réponses au stress cellulaire. Des altérations de l’expression de BCAS2 et une dérégulation de l’épissage ont été associées à des phénotypes oncogéniques dans plusieurs contextes tumoraux, reliant ce facteur à des voies qui contrôlent la prolifération et la signalisation des dommages à l’ADN. En tant que régulateur de la maturation de l’ARN, BCAS2 est également pertinent pour l’étude des vulnérabilités dépendantes du spliceosome et du remodelage transcriptomique global dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BCAS2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BCAS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BCAS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BCAS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BCAS2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BCAS2 pour l'étude de la signalisation de BCAS2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BCAS2 essentiels à la fonction de BCAS2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BCAS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BCAS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BCAS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BCAS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BCAS2 plasmide HDR (h) et le BCAS2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BCAS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BCAS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.