Plásmido CRISPR de Activación (h) BBS9: sc-404329-ACT

BBS9 codifica un componente central del complejo BBSome, que coordina el tráfico de proteínas de membrana hacia y desde el cilio primario, manteniendo la composición de la membrana ciliar y la fidelidad de la transducción de señales. Al asociarse con otras proteínas BBS, BBS9 contribuye a procesos vinculados al transporte intraflagelar que modelan la ciliogénesis y regulan la localización de receptores de vías como Hedgehog y otras redes de señalización dependientes de cilios. La alteración de la función de BBS9 se asocia con la biología de las ciliopatías, en las que un tráfico ciliar modificado puede afectar el patrón de desarrollo, la señalización sensorial y la homeostasis energética. Estas características hacen de BBS9 una diana útil para estudiar mecanismos dependientes del cilio, la dinámica del transporte de receptores y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

BBS9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BBS9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BBS9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BBS9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BBS9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BBS9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BBS9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BBS9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BBS9 en células tumorales con expresión de BBS9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.