Plasmide Double Nickase (h) BBS1: sc-410535-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BBS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BBS1 Double Nickase (h) et le plasmide BBS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BBS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BBS1 Antibody (F-1): sc-365138
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BBS1 | sc-410535-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BBS1 | sc-410535-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS1 code une sous-unité centrale du BBSome, un complexe multiprotéique qui coopère avec la machinerie IFT pour réguler le trafic des protéines membranaires ciliaires ainsi que la capacité de signalisation des cils primaires. En contrôlant la localisation et le renouvellement des récepteurs, BBS1 influence des voies dépendantes des cils, notamment Hedgehog et la signalisation médiée par les GPCR, avec des effets en aval sur l’homéostasie cellulaire, la régulation neuroendocrinienne et le développement. Une altération de BBS1 perturbe la ciliogenèse et le tri des cargos, entraînant une modification de la transduction du signal et des défauts de composition des cils. Des variants de BBS1 chez l’humain sont fortement associés au syndrome de Bardet–Biedl et à des ciliopathies apparentées, ce qui souligne son importance pour l’étude des mécanismes pathogènes liés aux cils.
BBS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BBS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BBS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BBS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BBS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.