Plasmide CRISPR d'Activation (h) BATF2: sc-403270-ACT

BATF2 (facteur de transcription 2 de type ATF, à « basic leucine zipper ») est un facteur de transcription bZIP inductible par l’interféron, qui s’associe à des membres de la famille AP‑1 afin de moduler des programmes d’expression génique liés à l’immunité innée et à la signalisation inflammatoire. Il participe à la régulation des réseaux de cytokines et de chimiokines et peut influencer les états de différenciation et d’activation dans des contextes cellulaires immunitaires et épithéliaux. L’activité de BATF2 est couramment étudiée dans des voies en aval des interférons de type I/II, de la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) et, plus largement, du contrôle transcriptionnel de la réponse au stress. Une expression dérégulée de BATF2 a été associée à des microenvironnements inflammatoires altérés et à des phénotypes liés à l’immunité observés dans divers modèles de maladies infectieuses ainsi que dans la recherche en biologie du cancer.

BATF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BATF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BATF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BATF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BATF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BATF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BATF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BATF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BATF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de BATF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.