Plasmide CRISPR/Cas9 KO bassoon (h): sc-406918

Présentation

BSN code la bassoon, une grande protéine échafaudage de la cytomatrice présynaptique qui organise la zone active et favorise une libération efficace des neurotransmetteurs. Bassoon contribue à l’amarrage et à la préparation (priming) des vésicules synaptiques, en couplant les pools de vésicules synaptiques à l’entrée de Ca²⁺ via des canaux calciques voltage-dépendants et en coordonnant les interactions avec d’autres composants de la zone active au cours de la synaptogenèse et du maintien synaptique. Par son rôle dans l’assemblage présynaptique et la dynamique du cycle vésiculaire, BSN est étudié dans des voies qui régissent la connectivité neuronale, la plasticité synaptique et la neurotransmission dépendante de l’activité. Des altérations de l’organisation synaptique associée à bassoon ont été explorées dans le contexte de mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques, où le dysfonctionnement présynaptique constitue un phénotype cellulaire fréquent.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO bassoon (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BSN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BSN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BSN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine bassoon.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BSN pour l'étude de la signalisation de bassoon, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BSN essentiels à la fonction de bassoon
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BSN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le bassoon plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le bassoon plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BSN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le bassoon plasmide HDR (h) et le bassoon (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BSN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BSN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.