Barx2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403458-ACT

Humanes BARX2 kodiert Barx2, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung und des Gewebeumbaus Zellschicksalsentscheidungen und Differenzierungsprogramme reguliert. Durch sequenzspezifische DNA-Bindung trägt Barx2 dazu bei, transkriptionelle Netzwerke zu koordinieren, die mit epithelial-mesenchymalen Interaktionen, Zytoskelettorganisation und der Regulation der extrazellulären Matrix verknüpft sind, und beeinflusst damit Prozesse wie Migration und Linienfestlegung. Die BARX2-Aktivität ist in übergeordnete entwicklungsbiologische Signalachsen eingebunden, die Morphogenese und zelluläre Plastizität prägen, was BARX2 für Studien zu Differenzierung, Regeneration und fehlregulierter transkriptioneller Kontrolle relevant macht. Veränderte BARX2-Expression wurde in unterschiedlichen Kontexten aberranter Gewebearchitektur und proliferativer Krankheitsbiologie beschrieben, was seinen Nutzen als mechanistischer Knotenpunkt zur Untersuchung transkriptioneller Signalwege unterstreicht.

Barx2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BARX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Barx2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BARX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BARX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Barx2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BARX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Barx2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Barx2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BARX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.