Plasmide Double Nickase (h) BARD1: sc-401212-NIC

BARD1 (BRCA1 associated RING domain 1) est une protéine suppresseur de tumeur qui forme un hétérodimère obligatoire avec BRCA1 afin de constituer un complexe E3 ubiquitine‑ligase, central pour la stabilité du génome. Ce complexe coordonne la réparation des cassures double brin de l’ADN, la protection des fourches de réplication et la signalisation des points de contrôle du cycle cellulaire, reliant ainsi BARD1 à la recombinaison homologue et, plus largement, aux voies de réponse aux dommages de l’ADN. Grâce à ses domaines RING et à répétitions ankyrines, BARD1 contribue à réguler l’ubiquitination des protéines et le recrutement de facteurs de réparation aux sites de dommages. Une dérégulation ou des variants pathogènes de BARD1 ont été associés à une diminution de la capacité de réparation de l’ADN et à une instabilité génomique accrue, ce qui souligne son importance dans l’étude des mécanismes de susceptibilité au cancer.

BARD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BARD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BARD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BARD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BARD1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.