BAMBI CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403701-ACT

BAMBI (BMP- und Activin-membranständiger Inhibitor) kodiert einen transmembranären Pseudorezeptor, der den Typ-I-Rezeptoren der TGF-β-Familie ähnelt, jedoch keine intrazelluläre Kinasedomäne besitzt und dadurch als kontextabhängiger Modulator der BMP- sowie TGF-β/Activin-Signalübertragung wirkt. Durch die Beeinflussung der SMAD-Phosphorylierungsdynamik und der Bildung von Rezeptorkomplexen kann BAMBI nachgeschaltete Transkriptionsprogramme feinabstimmen, die epitheliale–mesenchymale Plastizität, Differenzierung und Entzündungsantworten steuern. Eine dysregulierte BAMBI-Expression wurde mit einer veränderten Ausgabe des TGF-β-Signalwegs in fibrose- und entzündungsassoziierten Kontexten in Verbindung gebracht und wird häufig in Studien zum Tumormikromilieu und zur metastatischen Signalgebung untersucht. Als regulatorischer Knotenpunkt an der Membran ist BAMBI relevant, um das Cross-Talk zwischen BMP-, Wnt/β-Catenin- und NF-κB-assoziierten Programmen in humanen Zellmodellen zu analysieren.

BAMBI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BAMBI-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BAMBI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BAMBI-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BAMBI-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BAMBI-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BAMBI-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BAMBI-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BAMBI-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BAMBI-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.