Plasmide CRISPR/Cas9 KO BAI-2 (h): sc-406051

Présentation

ADGRB2 code le récepteur couplé aux protéines G d’adhésion BAI-2 (brain-specific angiogenesis inhibitor 2), un récepteur membranaire multidomaine enrichi dans le système nerveux et impliqué dans les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. En tant que GPCR d’adhésion, BAI-2 intègre des signaux extracellulaires à des programmes de signalisation intracellulaire qui façonnent l’organisation du cytosquelette, la dynamique membranaire et la communication cellulaire, contribuant à des processus tels que le développement neuronal et l’homéostasie tissulaire. Une signalisation des GPCR d’adhésion dérégulée a été associée à des microenvironnements angiogéniques et inflammatoires altérés, ainsi qu’à des modifications de la motilité cellulaire et des états de différenciation. Par conséquent, ADGRB2/BAI-2 est étudié dans des contextes incluant la neurobiologie et les réseaux de signalisation associés aux tumeurs, où des voies dépendantes de l’adhésion influencent des phénotypes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BAI-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADGRB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADGRB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADGRB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BAI-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADGRB2 pour l'étude de la signalisation de BAI-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADGRB2 essentiels à la fonction de BAI-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADGRB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BAI-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BAI-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADGRB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BAI-2 plasmide HDR (h) et le BAI-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADGRB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADGRB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.