BAI-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-430764-ACT

Das murine Adgrb1 kodiert den brain-specific angiogenesis inhibitor 1 (BAI-1), einen Adhäsions-GPCR, der im Nervensystem sowie in vaskulär assoziierten Mikromilieus angereichert ist. BAI-1 ist an Zell–Zell- und Zell–Matrix-Interaktionen beteiligt, fördert die Erkennung apoptotischer Zellen über eine phosphatidylserinabhängige Phagozytose und moduliert den Umbau des Zytoskeletts über die Signalgebung von Rho-Familien-GTPasen. Durch proteolytische Prozessierung können antiangiogene Fragmente freigesetzt werden, wodurch BAI-1 mit der Regulation von Gefäßwachstum und Gewebehomöostase verknüpft ist. Eine veränderte Expression oder Funktion von BAI-1 wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die für Neuroinflammation, synaptische Organisation, die Biologie des Tumormikromilieus und abnorme Angiogenese relevant sind, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien von ZNS- und vaskulären Phänotypen macht.

BAI-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Adgrb1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BAI-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Adgrb1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Adgrb1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BAI-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Adgrb1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BAI-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BAI-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Adgrb1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.