Plasmide CRISPR d'Activation (h) BAF60a: sc-402641-ACT

SMARCD1 code pour BAF60a, une sous-unité centrale du complexe SWI/SNF (BAF) de remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP, qui régule le positionnement des nucléosomes et l’accessibilité de la chromatine afin de contrôler les programmes transcriptionnels. BAF60a coordonne les interactions entre les facteurs de transcription et la machinerie de remodelage, influençant la spécification des lignages, la progression du cycle cellulaire et l’expression génique en réponse aux stimuli, notamment dans des voies liées au développement et à la différenciation. En tant que composant du complexe BAF, SMARCD1 contribue à la régulation épigénétique des états des enhancers et des promoteurs et s’articule avec des réseaux de signalisation tels que les circuits transcriptionnels des récepteurs hormonaux et de la réponse au stress. La dérégulation des composants SWI/SNF est associée à des états de chromatine altérés observés dans de nombreux cancers et des phénotypes neurodéveloppementaux, faisant de BAF60a une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

BAF60a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMARCD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BAF60a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMARCD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMARCD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BAF60a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMARCD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BAF60a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BAF60a dans les cellules tumorales présentant une expression de SMARCD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.