Plasmide CRISPR/Cas9 KO BAF53B (h): sc-409940

Présentation

ACTL6B code pour BAF53B, une sous-unité protéique apparentée à l’actine des complexes de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF) dépendants de l’ATP, enrichis dans les neurones, qui régulent le positionnement des nucléosomes et l’accessibilité de la chromatine. BAF53B soutient les programmes transcriptionnels nécessaires à la différenciation neuronale, à la maturation dendritique et synaptique, ainsi qu’à la régulation génique dépendante de l’activité, en coordonnant l’action d’autres composants BAF afin de moduler l’utilisation des enhancers et des promoteurs. Par ces fonctions épigénétiques, ACTL6B est lié à des voies qui contrôlent la temporalité du neurodéveloppement, la connectivité neuronale et la plasticité. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de ACTL6B/BAF53B ont été associées à des troubles du neurodéveloppement et à des états d’expression génique neuronale altérés, pertinents pour des modèles de phénotypes cognitifs et comportementaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BAF53B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACTL6B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACTL6B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACTL6B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BAF53B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACTL6B pour l'étude de la signalisation de BAF53B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ACTL6B essentiels à la fonction de BAF53B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACTL6B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BAF53B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BAF53B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACTL6B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BAF53B plasmide HDR (h) et le BAF53B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACTL6B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACTL6B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.