Plasmide Double Nickase (h) BAF53: sc-403200-NIC

ACTL6A code pour BAF53A, une sous-unité apparentée à l’actine du complexe SWI/SNF (BAF) de remodelage de la chromatine, dépendant de l’ATP, qui module le positionnement des nucléosomes et l’accessibilité de la chromatine. En régulant les paysages d’enhancers et de promoteurs, BAF53A contribue au contrôle transcriptionnel de la progression du cycle cellulaire, de la spécification de lignée et du maintien des états prolifératifs, en interaction avec des voies telles que les programmes transcriptionnels associés à MYC et à E2F. Une activité altérée d’ACTL6A/BAF53A a été liée à une dérégulation du contrôle épigénétique dans de multiples contextes de cancer ainsi qu’à une expression aberrante de gènes du développement, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier des phénotypes pilotés par la chromatine. L’étude fonctionnelle d’ACTL6A soutient les recherches mécanistiques sur les dépendances au remodelage de la chromatine, la plasticité transcriptionnelle et l’architecture régulatrice à l’échelle du génome dans les cellules humaines.

BAF53 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACTL6A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACTL6A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACTL6A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACTL6A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.