Plasmide CRISPR d'Activation (h) BAF53: sc-403200-ACT

ACTL6A code pour BAF53A, une sous-unité apparentée à l’actine du complexe SWI/SNF (BAF) de remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP, qui régule le positionnement des nucléosomes et l’accessibilité transcriptionnelle. BAF53A participe au contrôle, dépendant de la chromatine, de la progression du cycle cellulaire, de la spécification des lignages et des programmes transcriptionnels induits par les dommages à l’ADN, en interagissant avec des facteurs de transcription et d’autres sous-unités BAF afin de coordonner l’activité des enhancers et des promoteurs. Par son rôle dans la régulation épigénétique, ACTL6A influence des voies liées à la prolifération et à la différenciation, notamment l’organisation de la chromatine et la régulation de la transcription par l’ARN polymérase II. Une expression dérégulée d’ACTL6A et des modifications de la composition du complexe BAF ont été associées à des états transcriptionnels aberrants dans divers contextes cancéreux ainsi qu’à des phénotypes du développement, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique.

BAF53 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACTL6A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BAF53 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACTL6A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACTL6A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BAF53. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACTL6A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BAF53 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BAF53 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACTL6A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.