Plasmide Double Nickase (h) BAF170: sc-402023-NIC

SMARCC2 code pour BAF170, une sous-unité structurelle centrale du complexe SWI/SNF (BAF) de remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP, qui régule le positionnement des nucléosomes et l’organisation de la chromatine à un niveau supérieur. BAF170 soutient des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée en coordonnant l’accessibilité des enhancers et des promoteurs, influençant ainsi des processus tels que le développement neural, le contrôle du cycle cellulaire et la différenciation. Par ses interactions avec des facteurs impliqués dans la réponse aux dommages de l’ADN et dans les voies de régulation transcriptionnelle, SMARCC2 contribue au maintien de la stabilité du génome et de l’état épigénétique. Des altérations de la composition du complexe SWI/SNF ou une perturbation du remodelage de la chromatine associé à SMARCC2 ont été liées à des programmes d’expression génique aberrants observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment les cancers et les troubles du neurodéveloppement.

BAF170 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMARCC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMARCC2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMARCC2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMARCC2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.