Plasmide Double Nickase (h) BAF155: sc-400838-NIC

SMARCC1 code pour BAF155, une sous-unité d’échafaudage centrale du complexe humain de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF) dépendant de l’ATP, qui régule le positionnement des nucléosomes et l’accessibilité de la chromatine. BAF155 contribue à des programmes de contrôle transcriptionnel gouvernant l’engagement de lignée, la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN, via des interactions coordonnées avec des facteurs de transcription et des régulateurs épigénétiques. La perturbation de l’intégrité du complexe SWI/SNF remodèle les paysages des enhancers et des promoteurs, influençant des voies telles que la signalisation du développement et la maintenance du génome. Des altérations de la fonction de SMARCC1/BAF155 et un déséquilibre des sous-unités de SWI/SNF sont associés à des états chromatiniens déréglés observés dans de multiples contextes de cancers et de maladies neurodéveloppementales, faisant de SMARCC1 un point d’entrée utile pour des études mécanistiques du remodelage de la chromatine.

BAF155 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMARCC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMARCC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMARCC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMARCC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.