Plasmide CRISPR d'Activation (m) BACH2: sc-419284-ACT

Bach2 code le facteur de transcription BACH2, de la famille BTB/POZ et présentant une homologie CNC, un régulateur clé des programmes d’expression génique qui assurent l’équilibre entre l’activation immunitaire et la tolérance. Chez la souris, BACH2 façonne le développement et la fonction des lymphocytes, notamment la maturation des cellules B, les réseaux transcriptionnels associés à la commutation isotypique, ainsi que les décisions de lignage des cellules T, telles que la stabilité des lymphocytes T régulateurs et la différenciation des cellules effectrices. Il intègre des processus de signalisation et liés à la chromatine afin de moduler les réponses cytokinique, les voies du stress oxydatif et les points de contrôle associés à l’apoptose. Une activité de BACH2 dérégulée est associée à des pathologies à médiation immunitaire et à une homéostasie lymphoïde altérée, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de l’auto-immunité, de l’inflammation et de modèles de maladies hématologiques.

BACH2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Bach2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BACH2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Bach2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Bach2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BACH2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Bach2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BACH2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BACH2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Bach2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.