Plasmide CRISPR/Cas9 KO BACE2 (m): sc-425013

Présentation

Bace2 code l’enzyme murine de clivage de l’APP au site β 2 (BACE2), une protéase aspartyl transmembranaire de type I qui participe à la protéolyse intramembranaire régulée de certains substrats dans les voies sécrétoires et endosomales. L’activité de BACE2 influence la protéostasie et la maturation des protéines membranaires, en interagissant avec le trafic vésiculaire, le renouvellement lysosomal et les réponses au stress cellulaire liées à la physiologie neuronale et métabolique. Dans le système nerveux central, BACE2 a été étudiée dans le contexte de la maturation de la famille de la protéine précurseur de l’amyloïde (APP) et de la génération de peptides, ce qui éclaire la recherche sur des voies impliquées dans la neurodégénérescence. Dans les tissus périphériques, notamment les îlots pancréatiques, le clivage de substrats associé à BACE2 a été relié à la fonction des cellules β, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des maladies métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BACE2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Bace2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Bace2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Bace2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BACE2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Bace2 pour l'étude de la signalisation de BACE2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Bace2 essentiels à la fonction de BACE2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Bace2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BACE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BACE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Bace2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BACE2 plasmide HDR (m) et le BACE2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Bace2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Bace2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.