Plasmide CRISPR/Cas9 KO B7RP-1 (h): sc-406855

Présentation

ICOSLG code le ligand inductible du costimulateur des lymphocytes T (B7RP-1), une molécule de point de contrôle immunitaire de la famille B7 exprimée par les cellules présentatrices d’antigène et les compartiments stromaux, qui se lie à ICOS sur les lymphocytes T activés. Cette interaction favorise une signalisation costimulatrice soutenant la prolifération et la survie des lymphocytes T ainsi que leurs programmes de cytokines, et module les réactions du centre germinatif, la différenciation des lymphocytes T auxiliaires folliculaires et les réponses en anticorps avec commutation de classe. La signalisation ICOSLG–ICOS recoupe des voies dépendantes de PI3K–AKT et module le dialogue entre cellules immunitaires innées et adaptatives au sein des tissus inflammés et des microenvironnements tumoraux. Une expression ou une signalisation d’ICOSLG dérégulée a été impliquée dans l’inflammation auto-immune, les maladies allergiques, l’immunobiologie de la transplantation et des mécanismes d’échappement immunitaire pertinents pour la recherche sur le cancer et les infections chroniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO B7RP-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ICOSLG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ICOSLG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ICOSLG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine B7RP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ICOSLG pour l'étude de la signalisation de B7RP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ICOSLG essentiels à la fonction de B7RP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ICOSLG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le B7RP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le B7RP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ICOSLG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le B7RP-1 plasmide HDR (h) et le B7RP-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ICOSLG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ICOSLG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.