Plasmide Double Nickase (m) B7-H3: sc-430440-NIC

Cd276 code pour la glycoprotéine de surface immunorégulatrice B7-H3 (CD276), un membre de la famille B7 qui module les réponses des lymphocytes T et de l’immunité innée dans le microenvironnement immunitaire de la souris. La signalisation de B7-H3 est liée à la régulation de la présentation de l’antigène, de la production de cytokines et de l’activité des cellules myéloïdes, et s’inscrit dans la biologie des points de contrôle immunitaires qui façonnent les processus immunitaires inflammatoires et associés aux tumeurs. Outre la modulation immunitaire, B7-H3 a été associée à des voies contrôlant l’adhésion et la migration cellulaires ainsi qu’à des programmes de type transition épithélio-mésenchymateuse, ce qui la rend pertinente pour l’étude du remodelage tissulaire et de la biologie tumorale. Une expression altérée de Cd276 est fréquemment examinée comme marqueur d’échappement immunitaire et d’immunopathologie dans des modèles murins, soutenant des investigations mécanistiques en immunologie et en recherche sur le cancer.

B7-H3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cd276 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cd276. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cd276. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cd276.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.