Plasmide CRISPR/Cas9 KO B7-2 (m): sc-419575

Présentation

Cd86 code le ligand co‑stimulatoire B7‑2 (CD86), une glycoprotéine transmembranaire de type I exprimée par les cellules présentatrices d’antigène telles que les cellules dendritiques, les macrophages et les lymphocytes B. B7‑2 se lie à CD28 et à CTLA‑4 sur les lymphocytes T afin d’ajuster les seuils d’activation, la production de cytokines et la tolérance périphérique, en s’intégrant à la signalisation du TCR, aux programmes transcriptionnels NF‑κB/AP‑1 et à la régulation des points de contrôle immunitaires. Son expression inductible lors de la détection innée relie les signaux inflammatoires à l’amorçage de la réponse immunitaire adaptative et aux réponses des centres germinatifs. Une activité CD86 dérégulée est impliquée dans des modèles d’auto‑immunité, d’inflammation chronique, de réponses à la transplantation et d’échappement immunitaire tumoral, ce qui en fait un nœud clé pour la recherche en immunologie et en immuno‑oncologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO B7-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd86 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd86, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd86 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine B7-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd86 pour l'étude de la signalisation de B7-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd86 essentiels à la fonction de B7-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd86 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le B7-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le B7-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd86. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le B7-2 plasmide HDR (m) et le B7-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd86 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd86 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.