Particules Lentivirales d'Activation (h2) B-Myb: sc-401318-LAC-2

Le gène humain MYBL2 code le facteur de transcription B-Myb, un régulateur de la famille Myb qui coordonne la progression du cycle cellulaire en contrôlant l’expression des gènes nécessaires à la transition G1/S, à la réplication de l’ADN et à l’entrée en mitose. B-Myb agit au sein de l’axe régulateur DREAM–MMB et coopère avec les voies de signalisation pilotées par E2F et les complexes cycline/CDK pour moduler des programmes transcriptionnels associés à la chromatine et la stabilité du génome. Une activité dérégulée de MYBL2 est fréquemment liée à des phénotypes prolifératifs et a été associée à des signatures transcriptionnelles oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud moléculaire pertinent pour étudier le contrôle du cycle cellulaire et le remaniement des réseaux transcriptionnels. L’édition génétique de MYBL2 permet une interrogation mécanistique des points de contrôle de la prolifération, des réponses au stress de réplication et de la cartographie des dépendances aux facteurs de transcription dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales B-Myb (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MYBL2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales B-Myb (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MYBL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de B-Myb. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MYBL2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.