B-Myb CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401318-ACT

MYBL2 kodiert den humanen Transkriptionsfaktor B-Myb, einen Regulator der Myb-Familie, der für die Zellzyklusprogression und proliferationsbezogene Genexpressionsprogramme erforderlich ist. B-Myb unterstützt den Eintritt in die S-Phase und das Fortschreiten der Mitose, indem es transkriptionelle Netzwerke koordiniert, die mit CDK-Aktivität, E2F-abhängiger Signalgebung sowie DNA-Replikations- und Reparaturprozessen verknüpft sind. Eine fehlregulierte MYBL2-Expression wurde mit genomischer Instabilität und veränderter Checkpoint-Kontrolle in Zusammenhang gebracht und ist in unterschiedlichen, krebsrelevanten Kontexten häufig mit proliferativen Phänotypen verbunden. Als nukleärer transkriptioneller Regulator wird B-Myb häufig im Hinblick auf seine Rolle bei der Expansion von Zelllinien/Lineages, bei Stressantworten und bei der transkriptionellen Kontrolle von G2/M-Genmodulen untersucht.

B-Myb Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYBL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

B-Myb Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYBL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYBL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen B-Myb-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYBL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von B-Myb-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des B-Myb-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYBL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.