Plásmido CRISPR de Activación (h) B-ATF: sc-401553-ACT

BATF (B-ATF) es un factor de transcripción con motivo de cremallera de leucina básica (bZIP) que forma heterodímeros con proteínas de la familia JUN para unirse a elementos reguladores tipo AP-1 y moldear programas de expresión génica específicos de linaje. En las células inmunitarias humanas, BATF es un regulador clave de la diferenciación de las células T y de su función efectora, incluidas las vías que controlan la producción de citocinas, la biología de las células T colaboradoras foliculares (Tfh) y la activación de la inmunidad adaptativa. Al cooperar con miembros de la familia IRF en motivos compuestos de ADN, BATF influye en la accesibilidad de la cromatina y en redes transcripcionales que coordinan la señalización inmunitaria y las respuestas celulares al estrés. La actividad desregulada de BATF se ha asociado con fenotipos inmunitarios alterados y se ha implicado en mecanismos de enfermedades inflamatorias y en estados transcripcionales oncogénicos en contextos linfoides, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control transcripcional.

B-ATF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BATF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

B-ATF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BATF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BATF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de B-ATF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BATF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de B-ATF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía B-ATF en células tumorales con expresión de BATF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.