Plasmide CRISPR/Cas9 KO AVP Receptor V1a (h): sc-401691

Présentation

AVPR1A code le récepteur V1a de la vasopressine arginine, un GPCR de type rhodopsine qui se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, générant des signaux IP3/DAG qui augmentent le Ca²⁺ intracellulaire et stimulent des programmes transcriptionnels dépendants de la PKC. La signalisation du récepteur V1a régule la contraction du muscle lisse vasculaire, la réactivité plaquettaire, la glycogénolyse hépatique et des circuits neuromodulateurs impliqués dans les comportements sociaux et liés au stress. Dans les cellules, l’activité d’AVPR1A recoupe la signalisation MAPK/ERK, la régulation génique dépendante du calcium et le remodelage du cytosquelette qui influencent la contractilité et la migration. Une signalisation vasopressine–V1a dérégulée a été étudiée dans des phénotypes cardiovasculaires et métaboliques ainsi que dans des associations avec des traits neuropsychiatriques, ce qui étaye des études mécanistiques de la fonction du récepteur dans différents contextes tissulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AVP Receptor V1a (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AVPR1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AVPR1A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AVPR1A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AVP Receptor V1a.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AVPR1A pour l'étude de la signalisation de AVP Receptor V1a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AVPR1A essentiels à la fonction de AVP Receptor V1a
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AVPR1A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AVP Receptor V1a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AVP Receptor V1a plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AVPR1A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AVP Receptor V1a plasmide HDR (h) et le AVP Receptor V1a (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AVPR1A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AVPR1A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.