Plásmido CRISPR de Activación (h) AVP Receptor V1a: sc-401691-ACT

AVPR1A codifica el receptor humano 1A de vasopresina arginina (V1a), un GPCR de siete dominios transmembrana que se acopla predominantemente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, la señalización por fosfatos de inositol, la movilización de Ca²⁺ intracelular y programas transcripcionales dependientes de PKC. La señalización de V1a influye en el tono del músculo liso vascular, en las respuestas plaquetarias y endoteliales, y en los circuitos neuroendocrinos que regulan la reactividad al estrés y el comportamiento social, integrándose con MAPK/ERK y otras vías posteriores. La alteración de la expresión o de la señalización de AVPR1A se ha investigado en contextos de investigación cardiovascular y neuropsiquiátrica, incluyendo la regulación de la presión arterial, fenotipos vasoconstrictores y estudios de asociación con rasgos conductuales. Estos vínculos hacen de AVPR1A una diana útil para desentrañar la transducción de señales de los GPCR y la biología del eje de la vasopresina en modelos celulares.

AVP Receptor V1a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AVPR1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AVP Receptor V1a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AVPR1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AVPR1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AVP Receptor V1a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AVPR1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AVP Receptor V1a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AVP Receptor V1a en células tumorales con expresión de AVPR1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.