Attractin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406420-ACT

Il gene umano **ATRN** codifica **attractin**, una glicoproteina transmembrana implicata nella comunicazione tra cellule immunitarie e nella regolazione dell’infiammazione, inclusi ruoli nelle interazioni tra cellule T e monociti e nella modulazione dell’adesione cellulare guidata dalle chemochine. Attractin è stata collegata alla biologia della segnalazione melanocortinica attraverso interazioni con vie correlate all’agouti ed è associata a processi che modellano la dinamica della superficie cellulare e l’interazione con ligandi extracellulari. Influenzando il comportamento della sinapsi immunologica e i segnali che guidano il traffico leucocitario, **ATRN** è rilevante per studi su neuroinfiammazione e disregolazione immunitaria, ed è inoltre oggetto di indagine in contesti in cui alterazioni delle interazioni cellula–cellula contribuiscono a fenotipi patologici.

Attractin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ATRN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Attractin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ATRN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ATRN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Attractin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ATRN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Attractin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Attractin nelle cellule tumorali con espressione di ATRN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.